在细胞培养领域,将培养基中的血清(FBS)浓度降低到0-1%是一种常见且有效的手段,它可以促进细胞从“自助餐”模式转变为“轻断食”状态。血清中含有丰富的生长因子,去除这些因子后,细胞自然而然地会停留在G0/G1期,就像按下了暂停键⏸️,这样后续实验操作就可以更加灵活。
1. 同步周期:提高数据可靠性
为了实现细胞同步,避免细胞之间不同步造成的数据波动,可以让细胞在低血清条件下饥饿12-24小时,这样90%以上的细胞会同步停留在G0/G1期。从而在测定周期蛋白如CyclinD1和p27时,信号条带的清晰度会显著提高📈。
2. 激活凋亡和自噬:研究应激反应的新方法
在研究细胞应激反应时,通过撤掉血清,细胞进入“自救模式”,比如Caspase-3的水平会急剧上升💥,同时LC3-II斑点数量也会增加。这种处理为抗癌药物或自噬诱导剂的评估提供了完美的实验模型。
3. 提高转染效率:助力基因研究
在低血清条件下,细胞的新陈代谢减缓,外源的DNA和RNA更容易被细胞吸收。在进行转染实验时,例如将HEK293T细胞饥饿一夜,转染效率能够从30%提升至80%,甚至包括那些普遍难以转染的悬浮细胞也会顺利接受转染🤝。
4. 清除信号通路背景噪声:提升实验精度
血清中的生长因子往往会影响细胞信号通路的研究。通过让细胞在低血清条件下静养12小时,随后添加EGF或胰岛素进行刺激,能够清晰对比p-ERK和p-AKT的灰度变化,从而提升实验数据的明确度🔍。
5. 模拟体内微环境:助力肿瘤和干细胞研究
在研究肿瘤的营养状态或者干细胞的低氧环境时,使用0.5%血清能够有效复现这些条件。癌细胞的糖酵解过程及干细胞的干性维持现象都能够在此条件下被有效观察🔥。
预处理步骤
1. 细胞培养至70-80%汇合时,使用PBS轻柔洗涤两遍,彻底去除残存的血清“余味”🚿。
2. 饥饿处理,换用0-1%血清培养基,贴壁细胞静置,而悬浮细胞需降低转速以防沉淀🌀。
3. 唤醒细胞,在实验前重新加入正常血清,使细胞迅速恢复至“满血复活”状态,为后续的转染或药物处理做好准备⚡️。
通过这些方法,结合尊龙凯时的专业技术,细胞实验的成功率和可靠性将显著提升,推动生物医疗研究的进一步发展。