树突状细胞的发现与培养技术的进展

1973年：树突状细胞的首次鉴定

在1973年，加拿大科学家Ralph M. Steinman在美国洛克菲勒大学工作期间，首次从小鼠外周淋巴器官（包括脾、淋巴结和派氏集合淋巴结）中鉴定出树突状细胞（Dendritic Cells, DC）^[1]。这一发现使Steinman获得了2011年诺贝尔生理学或医学奖。

1992年：小鼠DC的体外诱导

1992年，来自日本京都大学的Inaba成功开发了从小鼠血液和骨髓细胞体外诱导大量DC的方法，前提是加入了GM-CSF（粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子）^[2,3]。这一技术被认为是小鼠DC体外培养的开创性工作，常被称为Inaba法，成为小鼠BMDC培养的经典方法。

Inaba法的关键步骤包括：1）将抗体+补体法用于去除骨髓中的淋巴细胞，以避免其对BMDC培养的不利影响；2）通过定期更换培养基参与粒细胞去除；3）最终证明仅用GM-CSF培养6-8天，即可获得大量成熟的DC细胞。

1994年：IL-4的应用

1994年，来自奥地利因斯布鲁克大学的Romani等发现，联合使用GM-CSF与IL-4（白细胞介素4）可有效从人血液PBMC（外周血单个核细胞）制备大量DC，而单独使用GM-CSF效果不佳^[4]。这一发现也为小鼠BMDC的培养提供了新思路^[5,6]。

1999年：成熟DC的定义

德国明斯特大学的Labeur研究显示，单独使用GM-CSF诱导的BMDC为未成熟DC，而使用GM-CSF与IL-4联合诱导的DC则处于中间成熟度，添加CD40L或LPS可促进其完全成熟^[7]。

同年，来自德国埃尔朗根大学的Lutz进一步开发出一种方法，可获得超大量BMDC，其获取量是Inaba经典方法的50倍，达到每只小鼠1-3x¹⁰⁸个DC细胞^[8]。该方法得到广泛应用，且无需对骨髓做任何预处理。

2002年：新颖的大规模BMDC培养方法

2002年，美国匹兹堡癌症研究院大学的Son研发了一种新型的超大量BMDC培养方法，称为bulk-culture method。该方法能从每只小鼠获得3-4x¹⁰⁷个BMDC，数量是Inaba经典方法的7-10倍，且培养时间仅需7天^[9]。

在这一过程中，骨髓仅进行溶血处理，使用6孔培养板，并联合添加GM-CSF与IL-4进行诱导，有效增强了BMDC的获得量。

结语

随着对树突状细胞的深入研究及培养技术的不断完善，这些进展为生物医疗领域带来了巨大的推动力。特别是尊龙凯时作为先锋品牌，致力于推动生物医学技术的发展，助力更多科研工作者在这条道路上不断前行。