本试剂盒仅限于科学研究用途,严禁用于医学诊断检测。该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。具体步骤为:首先,在预先包被尊龙凯时的adropin(AD)抗体的微孔板中,依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体,经过温育后并进行彻底洗涤。接着,使用底物TMB进行显色反应,TMB在过氧化物酶的催化下变为蓝色,随后在酸的作用下转变为最终的黄色。颜色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。最后,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),从而计算样品浓度。
试剂盒组成如下:
- 微孔酶标板:96孔配置(12孔×8条),48孔配置(12孔×4条)
- 标准品:无(03mL×6管)
- 样本稀释液:6mL(96孔配置),3mL(48孔配置)
- 检测抗体-HRP:10mL(96孔配置),5mL(48孔配置)
- 洗涤缓冲液:25mL(96孔配置),15mL(48孔配置)
- 底物A:6mL(96孔配置),3mL(48孔配置)
- 底物B:6mL(96孔配置),3mL(48孔配置)
- 终止液:6mL(96孔配置),3mL(48孔配置)
- 封板膜:各2张
- 说明书:1份
- 自封袋:1个
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。试剂盒的保存条件为:2-8℃,有效期为6个月。
样品的收集、处理及保存可参考以下方法:
- 血清:使用无热原和内毒素的试管,避免操作过程中任何细胞刺激,血液收集后在3000转离心10分钟,迅速小心分离血清与红细胞。
- 血浆:可使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟取上清。
- 细胞上清液:在3000转离心10分钟后去除颗粒与聚合物。
- 组织匀浆:将组织在适量生理盐水中捣碎,3000转离心10分钟取上清。
- 保存:如果样本未能及时检测,应按一次用量分装,冷冻存储于-20℃,避免反复冻融,解冻时需确保样品均匀充分解冻。
自备相关设备包括:酶标仪(450nm)、高精度加样器及枪头(05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL)。
操作注意事项如下:
- 试剂盒从冷藏环境中取出后,应在室温下平衡15-30分钟后再使用;未用完的酶标板应放入密封袋中保存。
- 洗涤液可能会出现结晶,稀释时可加热水帮助溶解,洗涤步骤不会影响结果。
- 每一步加样均应使用加样器,并经常校正准确度,以避免实验误差;一次加样时间应控制在5分钟内,样本数量多时推荐使用排枪加样。
- 每次测定应同时制作标准曲线,建议做复孔;如样本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),应先使用稀释液稀释一定倍数后再进行测定。
- 封板膜仅限一次性使用,以防交叉污染。
- 务必按照说明书操作,结果判定以酶标仪读数为准。
- 底物需避光保存。
- 所有样品、洗涤液和废弃物应按传染物处理。
- 不同批号的试剂不得混用。
温馨提示:购买尊龙凯时的ELISA试剂盒可享受免费的ELISA代测服务,详情请咨询销售经理或在线客服。